Prueba de la Oxidasa

PRUEBA DE LA OXIDASA

OBJETIVO

Se quiere determinar la presencia de la enzima citocromooxidasa en el microorganismo para poder identificarlo según su género y especie.

 FUNDAMENTO

 La prueba consiste en poner una colonia bacteriana en contacto con fenildiamina para saber si sintetiza la oxidasa.

 La enzima citocromooxidasa en presencia de oxigeno oxida la fenildiamina produciendo indofenol, que es un producto coloreado.

 Se realiza sobre una tira reactivo y si la zona reactiva en contacto con la bacteria vira a un color violeta es porque es oxidasa positiva. Si de la contrario no produce color en la zona reactiva es porque es oxidasa negativa y, por lo tanto, no está presente la enzima oxidasa.

 MATERIAL

 Papel de filtro
Mechero Bunsen
Gradilla
Asa de siembra
Tiras reactivas para la oxidasa
Siembra de bacterias 2 y 9

 PROTOCOLO

 Preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario y encendemos el mechero bunsen para tener un zona de trabajo estéril.

 Con la llama del mechero bunsen esterilizamos el asa de siembra y cogemos un inóculo de la bacteria, previamente el asa de siembra se enfria.

 Extendemos el inóculo de la bacteria sobre la zona reactiva de la tira reactiva de la oxidasa y volvemos a esterilizar el asa de siembra.

 Esperamos unos 10-30 segundos para poder leer los resultados.

 RESULTADOS

 La bacteria 2 es oxidasa negativa, no se ha producido cambio de color, y la bacteria 9 es oxidasa positiva ya que si ha producido un color violeta.
Oxidasa Negativa - Bacteria 2
Oxidasa Positiva - Bacteria 9

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