Tinción de Gram

TINCIÓN DE GRAM

OBJETIVO.

Se realiza la tinción para conocer la diferente naturaleza de algunas bacterias y averiguar si son Gram positivas o Gram negativas.


FUNDAMENTOS.

Las bacterias Gram positivas tienen una pared bacteriana mucho más gruesa que las Gram negativas.
Se utiliza un colorante catiónico, en este caso cristal violeta, que teñirá todas las bacterias ya que penetra dentro de su membrana.
Se usa Lugol como mordiente que forma complejos insolubles con el cristal violeta.
Se decoloran las bacterias con alcohol-acetona que solo decolorará las bacterias Gram negativas ya que disuelve su membrana externa y saca el colorante.
Por último, se una un colorante de contraste, safranina, que teñirán a las Gram negativas pero no las Gram positivas ya que no puede penetrar dentro de la membrana porque en ella se encuentra el cristal violeta.
Veremos las bacterias Gram positivas de color azul-violeta y las Gram negativa de color rosa.


MATERIAL.

Papel de filtro
Mechero Bunsen
Gradilla
Portaobjetos
Asa de siembra de platino
Pipeta pasteur
Batea
Puente de tinción
Microscopio óptico
Tubo con muestra 2 y 9.


REACTIVOS.

Cristal Violeta
Lugol
Alcohol-Acetona
Safranina
Suero fisiológico
Agua


PROTOCOLO.

Preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario.
Encendemos el mechero Bunsen para tener una área de trabajo estéril, para poder esterilizar el asa de siembra y para poder fijar la muestra.
Sobre el portaobjetos ponemos una gota de suero fisiológico y la muestra cogida con el asa de siembra, previamente esterilizada y enfriada antes de coger la muestra.
Realizamos la extensión con el asa de siembra y una vez hayamos acabo la esterilizamos con la llama.
Fijamos con la llama del mechero Bunsen.
Preparamos la batea con el puente de tinción sobre el que colocaremos el portaobjetos con la muestra fijada.
Realizamos la tinción:
     1- Cubrir con Cristal Violeta durante 1 minuto, tras ese tiempo decantamos y lavamos con agua.
     2- Cubrimos con Lugol durante 1 minuto, decantamos y lavamos con agua.
     3- Cubrir con Alcohol-Acetona durante 30 segundos, decantamos y lavamos con agua.
     4- Cubrimos la preparación con Safranina durante 2 minutos, decantamos y lavamos.
     5- lo dejamos secar y lo observamos en el microscopio óptico.


RESULTADO.

Tanto la muestra 2 y 9 son las dos Gram positivas.

Podemos observar en la muestra 2 bacilos.

Muestra 2 Gram positiva.

 En la  muestra 9 se ven claramente Estreptobacilos.


Muestra 9 Gram positiva.

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