Escala de McFarland
ESCALA DE MCFARLAND
OBJETIVO.
Se utilizan métodos de recuento estimado basados en la tubidez para realizar una estimación del número de bacterias totales, tanto viables como no viables. En este caso utilizaremos el método de estándares de turbidez de McFarland.
FUNDAMENTO.
Los estándares de McFarland son patrones de turbidez basados en suspensiones de sulfato de bario.
La escala de McFarland consta de 11 patrones (desde 0,5 a 10) cada uno de los cuales tiene una turbidez comparable a la de una suspensión bacteriana con una densidad determinada.
Para estimar la densidad bacteriana de una suspensión se compara visualmente su turbidez con la de los patrones realizados en la escala de McFarland, utilizando un fondo de contraste.
MATERIAL.
CÁLCULOS.
- Tubo 0,5 para Ácido Sulfúrico (1%)
10ml..........9,95ml
25ml.......... x
x= 24,875ml de Ácido Sulfúrico (1%)
- Tubo 0,5 para Cloruro de Bario (1,175%)
10ml..........9,95ml
25ml.......... x
x= 24,875ml de Cloruro de Bario (1,175%)
Realizamos la misma operación para todos los tubos de la escala de McFarland y obtenemos la siguiente tabla:
- Ácido Sulfúrico (1%)
VixCi=VfxCf
Vix98=500x1
Vi= 5,102ml de Ácido Sulfúrico.
- Cloruro de Bario (1,175%)
VixCi=VfxCf
Vix100=50x1,175
Vi= 0,587 gr. de Cloruro de Bario
PROTOCOLO.
En primer lugar tenemos que preparar las diluciones de Ácido Sulfúrico y Cloruro de Bario.
Para preparar el Ácido Sulfúrico se hará dentro de la cabina de seguridad.
En un vaso de precipitado echaremos agua destilada, ya que por seguridad el ácido no se debe echar lo primero.
A continuación, echaremos 5'10 ml de ácido sulfúrico en un vaso de precipitado, con una pipeta de cristal, en el vaso de precipitado en el que previamente hemos echado el agua destilada. Con una varilla de cristal lo agitamos bien.
Cogemos el matraz de 500 ml y, utilizando un embudo, echamos la mezcla de agua destilada con ácido sulfúrico. Se hará con cuidado y usando la varilla de vidrio para evitar salpicaduras.
Para finalizar enrasamos con agua destilada.
Pesaremos 0'587gr de Cloruro de Bario en la balanza, con ayuda de la espátula y el vidrio de reloj.
En un matraz de 50 ml echaremos un poco de agua destilada,usando un embudo, y a continuación, echaremos el Cloruro de Bario.
Homogeniezamos bien y enrasamos con agua destilada.
Una vez que tenemos el Ácido Sulfúrico al 1% y el Cloruro de Bario al 1,175% podemos preparar los 11 tubos de la escala de McFarland.
Prepararemos todos los tubos, rotulados, en una gradilla y dentro de la cabina de seguridad.
Echaremos un poco de Ácido Sulfúrico (1%) en un vaso de precipitado y, con una pipeta de cristal, se echa la cantidad, calculada previamente,en cada tubo.
Repetiremos la misma operación con el Cloruro de Bario (1,175%), verteremos un poco en un vaso de precipitado.
Con una micropipeta cogeremos la cantidad requerida en cada tubo y se homogeinizan bien.
De esta manera tendremos los 11 tubos de la escala de McFarland preparados.
RESULTADOS.
Ya están preparados los 11 tubos con diferente turbidez cada uno.
11 tubos de ensayo para escala de McFarland
Matraz de 500ml
Matraz de 50 ml
Vaso de precipitado
Papel de filtro
Embudo
Pipeta pasteur
Varilla
Vidrio de reloj
Espátula
Balanza
Pipeta de cristal y cremallera
Micropipeta
Frasco lavador.
Matraz de 500ml
Matraz de 50 ml
Vaso de precipitado
Papel de filtro
Embudo
Pipeta pasteur
Varilla
Vidrio de reloj
Espátula
Balanza
Pipeta de cristal y cremallera
Micropipeta
Frasco lavador.
REACTIVOS.
Ácido Sulfúrico (1%)
Cloruro de Bario (1,175%)
Cloruro de Bario (1,175%)
- Cálculos de la escala de McFarland para tubos de 25 ml.
- Tubo 0,5 para Ácido Sulfúrico (1%)
10ml..........9,95ml
25ml.......... x
x= 24,875ml de Ácido Sulfúrico (1%)
- Tubo 0,5 para Cloruro de Bario (1,175%)
10ml..........9,95ml
25ml.......... x
x= 24,875ml de Cloruro de Bario (1,175%)
Realizamos la misma operación para todos los tubos de la escala de McFarland y obtenemos la siguiente tabla:
- Cálculos para las diluciones de Ácido Sulfúrico, que se encuentra al 98% y lo queremos al 1%, y Cloruro de Bario, que está al 100% y lo queremos al 1,175%.
- Ácido Sulfúrico (1%)
VixCi=VfxCf
Vix98=500x1
Vi= 5,102ml de Ácido Sulfúrico.
- Cloruro de Bario (1,175%)
VixCi=VfxCf
Vix100=50x1,175
Vi= 0,587 gr. de Cloruro de Bario
PROTOCOLO.
En primer lugar tenemos que preparar las diluciones de Ácido Sulfúrico y Cloruro de Bario.
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| Cloruro de Bario |
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| Ácido Sulfúrico |
Para preparar el Ácido Sulfúrico se hará dentro de la cabina de seguridad.
En un vaso de precipitado echaremos agua destilada, ya que por seguridad el ácido no se debe echar lo primero.
A continuación, echaremos 5'10 ml de ácido sulfúrico en un vaso de precipitado, con una pipeta de cristal, en el vaso de precipitado en el que previamente hemos echado el agua destilada. Con una varilla de cristal lo agitamos bien.
Cogemos el matraz de 500 ml y, utilizando un embudo, echamos la mezcla de agua destilada con ácido sulfúrico. Se hará con cuidado y usando la varilla de vidrio para evitar salpicaduras.
Para finalizar enrasamos con agua destilada.
Pesaremos 0'587gr de Cloruro de Bario en la balanza, con ayuda de la espátula y el vidrio de reloj.
En un matraz de 50 ml echaremos un poco de agua destilada,usando un embudo, y a continuación, echaremos el Cloruro de Bario.
Homogeniezamos bien y enrasamos con agua destilada.
Una vez que tenemos el Ácido Sulfúrico al 1% y el Cloruro de Bario al 1,175% podemos preparar los 11 tubos de la escala de McFarland.
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| Ácido Sulfúrico (1%) |
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| Cloruro de Bario (1,175%) |
Echaremos un poco de Ácido Sulfúrico (1%) en un vaso de precipitado y, con una pipeta de cristal, se echa la cantidad, calculada previamente,en cada tubo.
Repetiremos la misma operación con el Cloruro de Bario (1,175%), verteremos un poco en un vaso de precipitado.
De esta manera tendremos los 11 tubos de la escala de McFarland preparados.
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| Comparación de turbidez en la escala de McFarland del tubo 0,5 y 10 |
RESULTADOS.
Ya están preparados los 11 tubos con diferente turbidez cada uno.
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