Tinción de Wirtz-Conklin (Tinción de esporas).

TINCIÓN DE WIRTZ-CONKLIN (TINCIÓN DE ESPORAS)


OBJETIVO.

Usar colorantes para saber si las bacterias que se encuentran en la muestra espurulan o no.


FUNDAMENTO.

Teñir endosporas bacterianas es muy complicado por su situación y su estructura.
Para ello vamos a utilizar un colorante en caliente, verde malaquita al 5%, para facilitar la penetración del colorante en el interior de las esporas y usaremos un colorante de contraste, safranina al 0,5% para teñir el resto de bacterias (Bacilos que no hayan espurulado).
Como resultado observaremos las esporas de color verde y los bacilos sin espurular de color rosa.
MATERIAL.
Papel de filtro
Mechero Bunsen
Portaobjetos
Asa de siembra de platino
Pipeta pasteur
Gradilla
Rejilla metálica
Pinza de madera
Vaso de precipitado
Tolunda con algodón y gasa
Tubo con muestra ESP1,ESP2, 2 y 9.
Microscopio óptico


REACTIVOS.

Verde malaquita al 5%
Safranina al 0,5%
Suero fisiológico
Agua destilada.
Agua
Alcohol 96%


PROTOCOLO.

Preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario.
Encendemos el mechero Bunsen para tener una área de trabajo estéril, para poder esterilizar el asa de siembra y para poder fijar la muestra.
Sobre el portaobjetos ponemos una gota de suero fisiológico y la muestra cogida con el asa de siembra, previamente esterilizada y enfriada antes de coger la muestra.
 

Realizamos la extensión con el asa de siembra y una vez hayamos acabo la esterilizamos con la llama.

Fijamos con la llama del mechero Bunsen.
                  

Preparamos la rejilla sobre el fregadero y colocamos sobre ella las muestras.
Antes de empezar con la tinción preparamos la torunda con el algodón y la gasas y la empapamos con alcohol 96%.

Realizamos la tinción:
     1- Cubrir con Verde malaquita al 5% durante 5 minutos y pasamos por debajo de los portaobjetos con el colorante la torunda encendida y tiene que emitir vapores durante los 5 minutos. Tras ese tiempo decantamos y lavamos con agua destilada.
La torunda la apagamos en un vaso con agua. Es importante tener dos vasos de precipitado, bien rotulados, separados, uno con agua y otro con alcohol.
   
   
   
     2- Cubrimos la preparación con Safranina durante 2 minutos, decantamos y lavamos con agua destilada.

     3- Lo dejamos secar y lo observamos en el microscopio óptico.


RESULTADO.

Al observar todas las muestras al microscopio óptico vemos que todas son bacilos que han espurulado ya que se ven de color verde.
Muestras que han espurulado ESP 1 y 2.
Muestras que han espurulado 2 y 9.
  



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