Tinción simple con azul de metileno

 TINCIÓN SIMPLE CON AZUL DE METILENO.

OBJETIVO.

Se utiliza el colorante para teñir los diferentes microorganismos para su posterior observación mientras aún siguen vivos.

FUNDAMENTO.

La tinción simple se utiliza como único colorante disuelto en disolución acuosa o alcohólica, de manera que todas las bacterias presentes en la extensión se tiñen por igual, de forma homogénea.

El uso del colorante se puede suplementar con un mordiente que ayuda a la fijación del colorante.

La tinción azul de metileno es una tinción positiva (colorea las bacterias) y se realiza sobre extensiones fijadas por calor.

MATERIAL.

Papel de filtro

Asa de siembra de platino

Mechero Bunsen

Pinza de madera

Portaobjetos

Gradilla

Puente de tinción

Colorante azul de metileno

Suero fisiológico

Muestra: Actimel

PROTOCOLO.

Preparamos todo el material necesario en la mesa de trabajo.

Encendemos el mechero Bunsen para tener una zona de trabajo estéril y para poder esterilizar el asa de siembra de platino que tiene que ponerse al rojo vivo.

Introducimos el asa en el Actimel y se mueve bien para coger mayor cantidad de carga posible.

En el portaobjetos ponemos una gota de suero fisiológico y encima la gota de Actimel y se extiende bien.

    

A continuación, fijamos la muestra al portaobjetos con calor. Cogemos el portaobjetos con la muestra con una pinza de madera y lo pasaremos por la llama del mechero Bunsen con mucho cuidado de no romper el portaobjetos por dejarlo demasiado tiempo en el fuego.

Una vez que esté fijada la muestra se verá de color blanquecino.

Colocamos el portaobjetos sobre sobre un puente de tinción, en el fregadero o en una batea, y lo cubrimos con azul de metileno durante dos minutos.

Transcurrido este tiempo decantamos el portaobjetos y lo lavamos con abundante agua destilada.

Una vez que se haya secado observamos la muestra al microscopio óptico.


RESULTADOS.

Conseguimos un gran contraste que nos permite visualizar los microorganismos presentes en la muestra.

Al observarla vemos diplococos y no lactobacilos.