Antibiograma en Mueller-Hinton

ANTIBIOGRAMA EN MUELLER HINTON.

OBJETIVO.

Es un  proceso microbiológico que permite determinar la sensibilidad o resistencia de una cepa bacteriana frente a un grupo de antibióticos.

FUNDAMENTO.

Con esta practica se quiere evaluar la concentración mínima inhibitoria (CMI) que es la sensibilidad que tiene una bacteria a un antibiótico.

Para ello vamos a usar la técnica de Kirby-Bauer que consiste en poner unos discos de papel de filtro impregnados con una cantidad especifica de antibiótico.

Estos disco se colocan sobre una placa con un cultivo bacteriano para poder saber la resistencia de estas a los antibióticos.

Si la cepa es sensible al antibiótico es porque la bacteria no es resistente a él y por lo tanto no puede crecer pero si la cepa es resistente a esa antibiótico si crecerá alrededor del disco.

MATERIAL.

Mechero Bunsen
Papel de filtro

Asa de Digralsky
Asa de siembra de platino

Gradilla
2 tubos de ensayo para suspensión bacteriana

Tubo con muestra 2 y 9.
Placa de Petri con Mueller-Hinton
Suero Fisiológico estéril
Vaso de precipitado

PROTOCOLO.

En la mesa de trabajo preparamos el material necesario para realizar la siembra de los microorganismos.

Se enciende el mechero Bunsen para tener un área de trabajo estéril.

Preparamos un tubo de ensayo con suero fisiológico estéril.

Con el asa de siembra de platino, esterilizada con la llama del mechero Bunsen.

Cogemos un inóculo de la muestra 2, previamente enfriada para no matar a los microorganismos, y la disgregamos en el suero fisiológico.

Lo que se quiere conseguir es una turbidez de 0'5 en la escala de McFarland y para ello lo iremos comparando con el tubo preparado anteriormente (Práctica 13) y usando un fondo de contraste.

Con una micropipeta cogeremos 100 ul de la preparación del microorganismos 2 en el suero al 0,5 en la escala de McFarland y lo echaremos en el centro de una placa de Petri con Mueller-Hinton.

Placa de petri con Mueller-Hinton

Se realizará una siembra masiva en superficie con una asa de Digralsky.

Cogeremos el asa y la empaparemos con Etanol, con la ayuda de un vaso de precipitado, y sin dejar que gotee la esterilizamos con la llama del mechero Bunsen.

Primero rotulamos la placa de petri indicando la fecha y el tipo de microorganismo.

Medio enriquecido Mueller-Hinton

Realizamos la siembra moviendo el asa por toda la superficie de la placa.

Ahora se deben poner los discos de antibiótico.

Cogemos unas pinzas metálicas y las pasamos por etanol y las esterilizamos con la llama del mechero bunsen.

    

Con cuidado se cogen los discos de antibiótico y se colocan, de manera equidistante, sobre la placa. Los discos en la placa se presionan un poco sobre el agar con las pinzas para que no se caigan.

En este caso vamos a poner los siguientes disco de antibiótico:

• Colistín Cl10
• Amoxicilina + Clavulánico AMC30
• Amikacín AN30
• Azlocillín AZL 75

Después de poner los discos pasamos las pinzas por etanol y las volvemos a esterilizar con la llama del mechero bunsen.

Repetimos esta operación con los 4 discos de antibiótico y en las dos placas de petri con las dos bacterias.

Cada vez que cogemos un disco distinto debemos esterilizar las pinzas.

Incubamos la placa de petri en la estufa a 37ºC durante 18h y transcurrido este tiempo se podrá observar si las bacterias son resistentes para esos antibióticos.

RESULTADOS.

Para saber la resistencia de las bacterias a los antibioticos que le hemos puesto se debe medir el diametro que genera el halo alrededor del disco sobre la placa cultivada.

A menor resistencia mayor será el halo que se produzco.

Se comparan los resultados con unas tablas establacidas de las que obtenemos los siguientes resultados: 

- Para la Bacteria 9:

• Colistín Cl10: Hay resistencia.
• Amoxicilina + Clavulánico AMC30: Hay resistencia.
• Amikacín AN30:  ⌀ 25 mm Sensible
• Azlocillín AZL 75: Hay resistencia.

Bacteria Nº9

- Para la Bacteria 2 :

• Colistín Cl10: ⌀ 10'8 mm Sensibilidad Media
• Amoxicilina + Clavulánico AMC30: ⌀ 57 mm Sensible
• Amikacín AN30:  ⌀ 25'2 mm Sensible
• Azlocillín AZL 75: Hay resistencia.

Bacteria Nº2

(*)NOTA.

El Agar Mueller-Hinton es un medio recomendado para realizar pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. Es un medio enriquecido y es una base excelente para suplementarla con sangre y así poder obtener medios de agar sangre para cultivo y aislamiento de bacterias exigentes.

Composición del medio Mueller-Hinton (g/l).