Prueba de la Potasa

PRUEBA DE LA POTASA 

OBJETIVO

Identificación de bacterias Gram positivas y Gram negativas sin necesidad de realizar una tinción.

FUNDAMENTO

El KOH al 3% es una prueba de Screening que disuelve la capa de peptidoglicano de las bacterias Gram negativas, al ser su pared celular mucho más fina que las Gram positivas, a las que el KOH al 3% no les afecta.

El KOH lisa la célula y libera su contenido al exterior. El ADN, junto a las proteínas desnaturalizadas, al estar en contacto con el KOH forma una solución viscosa. Si, con ayuda de una asa de siembra, levantamos esa solución viscosa se forma un hilo es porque la bacteria es Gram negativas, si no se forma el hila al levantar es porque la bacteria es Gram positiva.

MATERIAL

-Para la realización de la prueba:
Papel de filtro
Mechero Bunsen
Asa de siembra
Portaobjetos
Gradilla
Pipeta pasteur
Cultivo de bacterias 2 y 9
Gradilla
KOH al 3%

-Para la preparación del KOH:
Agua destilada
Embudo
Balanza
Vidrio de reloj
Espátula
Mortero
Matraz

PROTOCOLO

Primero realizamos la preparación del KOH al 3% (m/v) y para ello tenemos que calcular la cantidad de KOH necesaria ya que se encuentra al 90% y en forma sólida (lentejas).

100_______90
x    _______3              x= (100x3)/90 = 3'33 gr de KOH.

Pesamos un poco más de cantidad en la balanza, con ayuda de una espátula y sobre un vidrio de reloj, ya que al estar en forma de lentejas se tiene que machacar.

Volvemos a pesar el KOH una vez pulverizado y pesamos 3'33 gr.

Lo echamos en un matraz de 100 ml, con ayuda de un embudo, y enrasamos hasta los 100 ml.

Una vez preparada el KOH al 3%, preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario.











Encendemos el mechero bunsen para tener una zona de trabajo estéril y así poder esterilizar el asa de siembra con la llama del mechero.

Ponemos una gota de KOH al 3% en un portaobjetos, con ayuda de una pipeta pasteur, y cogemos un inóculo de la bacteria 2 con el asa de siembra. Disolvemos el inóculo sobre la gota de KOH al 3% y levantamos el asa para observar se si forma el hilo.



RESULTADO

Tanto la bacteria 2 y 9 son Gram positivas ya que en ninguna de las dos se ha formado el hilo al levantar.

Bacteria Gram positiva





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