Preparación de medios de cultivo.
PREPARACIÓN
DE MEDIO DE CULTIVO.
OBJETIVO.
Preparar
medios estériles, los cuales son concentrados de nutrientes para poder realizar
el cultivo de diferentes microorganismos.
FUNDAMENTO.
La
composición precisa del medio de cultivo dependerá de la especie que se quiera
cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente.
El
procedimiento básico de una preparación, que suelen ser a partir de medios
deshidratados, se desarrolla en tres fases: disolución del producto en polvo o
mezcla de ingredientes, esterilización del medio, distribución del medio en
placas o en tubos.
Los medios de
cultivo pueden ser sólidos, líquidos o semisólidos.
MATERIAL.
Piseta Frasco de rosca Embudo Probeta Vidrio de reloj Espátula Balanza Autoclave Cabina de flujo laminar
Papel de filtro
Agar nutritivo
Primero hay que realizar los
cálculos para la preparación del Agar nutritivo.
La casa comercial nos indica
que hay que diluir 23 gr de Agar nutritivo en polvo en 1l de agua destilada.
Nosotros vamos a
preparar 300 ml de Agar nutritivo.
23 gr --------- 1000ml
X ---------------300ml
X= 6,9 gr.
X= 6,9 gr.
● Preparación del medio en
placa de Petri.
Se pesa en la balanza, con la
ayuda de un vidrio de reloj y la espátula, la cantidad de agar en polvo que se
ha calcula previamente.
En la probeta medimos la
cantidad de agua destilada necesaria, en este caso 300ml.
Vertemos un poco de agua
destilada en el frasco, con la ayuda de un embudo, a continuación, echamos los
6,9 gr. de agar nutritivo y el resto de agua.
Calentamos la preparación en
el microondas hasta que se vuelva transparente con mucho cuidado de que no
hierva y se salga del frasco.
Se mete en el autoclave para
esterilizar el medio de cultivo.
También se pondrá un indicador
de esterilización para asegurarnos de que el medio está esterilizado.
Mientras el medio está en el
autoclave se van rotulando las placas de Petri. Estas se rotulan en la parte de
abajo, no en la tapadera, y en el lateral, en el que podremos el medio
utilizado, en este caso AN (Agar nutritivo) y la fecha de realización del
medio.
Cuando el frasco con el medio de cultivo del autoclave, lo llevamos a la
cabina de seguridad, la cual está esterilizada al encender la UV unos 10
minutos antes y le pasamos un algodón con alcohol por toda la superficie.
Abrimos todas las placas de Petri y vamos vertiendo el medio, de izquierda
a derecha, en cada una de ellas.
Las dejamos solidificar dentro
de la cabina de flujo laminar.
Cuando se hayan solidificado y enfriado las cerramos y les damos la vuelta a las placas dejando el cultivo en la parte de arriba.
Cuando se hayan solidificado y enfriado las cerramos y les damos la vuelta a las placas dejando el cultivo en la parte de arriba.
Si la preparación de las
placas se realiza fuera la cabina de seguridad se tiene que hacer en un espacio
esterilizado y esto lo conseguimos con la ayuda de un mechero Bunsen
Se hace una pila con todas las
placas y se ponen cerca del mechero. Cada poco tiempo hay que esterilizar la
boca del frasco para esterilizarlo y no hay que dejar las placas mucho tiempo
abiertas para evitar que se contaminen.
Apilamos todas las placas con
el medio y las envolvemos en papel de aluminio, lo rotulamos con el tipo de
medio y la fecha de realización y las guardamos en la nevera.
● Preparación del medio en
tubo.
Para realizar
la preparación de medio en tubo se realizan los mismos pasos anteriormente
descritos hasta que sacamos el frasco del microondas.
No metemos el
frasco en el autoclave si no que dispensamos 8 ml en tubos, con una pipeta de
cristal, y les ponemos un tapón.
Los
distribuimos en una gradilla y los tapamos con papel de aluminio, lo rotulamos
para identificarlo y los metemos en el autoclave.
Una vez
esterilizados, se inclinan para que haya una mayor superficie para el cultivo
hasta que gelifiquen. Una vez que hayan solidificado, se ponen en la gradilla y
se guardan en la nevera tapados con papel de aluminio rotulados con el tipo de
cultivo y la fecha de realización.
RESULTADOS.
Tenemos
preparados bastantes medios de cultivo en placas de Petri y en tubos con el
medio inclinado para poder realizar cultivos de microorganismos.
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