Prueba de la Potasa

PRUEBA DE LA POTASA 

OBJETIVO

Identificación de bacterias Gram positivas y Gram negativas sin necesidad de realizar una tinción.

FUNDAMENTO

El KOH al 3% es una prueba de Screening que disuelve la capa de peptidoglicano de las bacterias Gram negativas, al ser su pared celular mucho más fina que las Gram positivas, a las que el KOH al 3% no les afecta.

El KOH lisa la célula y libera su contenido al exterior. El ADN, junto a las proteínas desnaturalizadas, al estar en contacto con el KOH forma una solución viscosa. Si, con ayuda de una asa de siembra, levantamos esa solución viscosa se forma un hilo es porque la bacteria es Gram negativas, si no se forma el hila al levantar es porque la bacteria es Gram positiva.

MATERIAL

-Para la realización de la prueba:
Papel de filtro
Mechero Bunsen
Asa de siembra
Portaobjetos
Gradilla
Pipeta pasteur
Cultivo de bacterias 2 y 9
Gradilla
KOH al 3%

-Para la preparación del KOH:
Agua destilada
Embudo
Balanza
Vidrio de reloj
Espátula
Mortero
Matraz

PROTOCOLO

Primero realizamos la preparación del KOH al 3% (m/v) y para ello tenemos que calcular la cantidad de KOH necesaria ya que se encuentra al 90% y en forma sólida (lentejas).

100_______90
x    _______3              x= (100x3)/90 = 3'33 gr de KOH.

Pesamos un poco más de cantidad en la balanza, con ayuda de una espátula y sobre un vidrio de reloj, ya que al estar en forma de lentejas se tiene que machacar.

Volvemos a pesar el KOH una vez pulverizado y pesamos 3'33 gr.

Lo echamos en un matraz de 100 ml, con ayuda de un embudo, y enrasamos hasta los 100 ml.

Una vez preparada el KOH al 3%, preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario.











Encendemos el mechero bunsen para tener una zona de trabajo estéril y así poder esterilizar el asa de siembra con la llama del mechero.

Ponemos una gota de KOH al 3% en un portaobjetos, con ayuda de una pipeta pasteur, y cogemos un inóculo de la bacteria 2 con el asa de siembra. Disolvemos el inóculo sobre la gota de KOH al 3% y levantamos el asa para observar se si forma el hilo.



RESULTADO

Tanto la bacteria 2 y 9 son Gram positivas ya que en ninguna de las dos se ha formado el hilo al levantar.

Bacteria Gram positiva





Comentarios

Publicar un comentario

Entradas populares de este blog

Escala de McFarland

Imagen
ESCALA DE MCFARLAND OBJETIVO. Se utilizan métodos de recuento estimado basados en la tubidez para realizar una estimación del número de bacterias totales, tanto viables como no viables. En este caso utilizaremos el método de estándares de turbidez de McFarland. FUNDAMENTO. Los estándares de McFarland son patrones de turbidez basados en suspensiones de sulfato de bario. La escala de McFarland consta de 11 patrones (desde 0,5 a 10) cada uno de los cuales tiene una turbidez comparable a la de una suspensión bacteriana con una densidad determinada. Para estimar la densidad bacteriana de una suspensión se compara visualmente su turbidez con la de los patrones realizados en la escala de McFarland, utilizando un fondo de contraste. MATERIAL. 11 tubos de ensayo para escala de McFarland Matraz de 500ml Matraz de 50 ml Vaso de precipitado Papel de filtro Embudo Pipeta pasteur Varilla Vidrio de reloj Espátula Balanza Pipeta de cristal y cremallera Microp...
Leer más

Prueba de KIA

Imagen
PRUEBA DE KIA OBJETIVO Tras la siembra en medio Agar de hiero de Kligler se quiere identificar Enterobacterias. FUNDAMENTO Identificación de Enterobacterias fermentadoras de glucosa y lactosa, que producen gases como el producto final del metabolismo y precipitación de ácido sulfhídrico que se observan como sales de hierro de color negruzco. MATERIAL Papel de filtro Mechero Bunsen Gradilla Asa de siembra Siembra de bacterias 2 y 9 Medio de cultivo KIA PROTOCOLO Se prepara la mesa de trabajo con todo el material necesario y se enciende el mechero bunsen para mantener una zona de trabajo estéril. Se coge un inóculo de la bacteria 2, esterilizando y enfriando el asa de siembra, y se realiza la siembra en el agar KIA. ` La siembra se realiza haciendo una picadura en el agar y al sacar la punta del asa se termina la siembra realizando una estría en la superficie. Realizamos la misma acción con la bacteria 9.   Se incuba a ...
Leer más

Tinción simple con azul de metileno

Imagen
  TINCIÓN SIMPLE CON AZUL DE METILENO. OBJETIVO. Se utiliza el colorante para teñir los diferentes microorganismos para su posterior observación mientras aún siguen vivos. FUNDAMENTO. La tinción simple se utiliza como único colorante disuelto en disolución acuosa o alcohólica, de manera que todas las bacterias presentes en la extensión se tiñen por igual, de forma homogénea. El uso del colorante se puede suplementar con un mordiente que ayuda a la fijación del colorante. La tinción azul de metileno es una tinción positiva (colorea las bacterias) y se realiza sobre extensiones fijadas por calor. MATERIAL. Papel de filtro Asa de siembra de platino Mechero Bunsen Pinza de madera Portaobjetos Gradilla Puente de tinción Colorante azul de metileno Suero fisiológico Muestra: Actimel PROTOCOLO. Preparamos todo el material necesario en la mesa de trabajo. Encendemos el mechero Bunsen para tener una zona de trabajo estéril y para pod...
Leer más