IMVIC
IMVIC
OBJETIVO
Prueba combinada para la identificación de Enterobacterias su género y especie.
FUNDAMENTO
Se realizan varias pruebas a una bacteria para poder identificar el tipo de Enterobacteria es:
I: Indol
M: Rojo metilo
V: Voges Proscauer
I
C: Citrato
- Indol.
Se realiza un medio de cultivo en agua de peptona. El indol surge del metabolismo del triptófano por la enzima triptofanasa.
Para saber si la bacteria es capaz de degradar el triptófano se utiliza el reactivo Kovac que reacciona con el indol y forma un anillo coloreado en la parte superior del medio.
Si el resultado es un anillo de color rosa intenso es indol posotivo, por lo que degrada en triptofano, y si el anillo es de color amarillo es indol negativo.
Composición g/l del agua de peptona.
- Rojo Metilo.
Medio de cultivo Clark Lubs (MRVP).
Para determinar la capacidad de la bacteria de fermentar la glucosa por la vía de fermentación ácida mixta que produce etanol y una mezcla de otros ácidos. Para detectarlo se utiliza un indicar de pH rojo metilo que actúa entre 4'2 (rojo) y 6'3 (amarillo).
Si el medio se vuelve rojo se considera positivo a la fermentación de glucosa por la vía ácido mixta y si se queda del color del medio, amarillento, es negativo para la fermentación de glucosa por la vía ácido mixta.
La prueba se debe realizar a las 48h después de realizar la siembra para evitar falsos positivos porque estén fermentando otros alcoholes.
Composición g/l del MRVP
Para determinar la capacidad de la bacteria de fermentar la glucosa por la vía de fermentación butanodiólica: produce acetoína que se transforma en 2-3 butanoidil, por la acción alfa-naftol, y produce un compuesto de color rojizo. Para ello se utilizan los reactivos pvA, KOH al 40%, y pvB, alfa-naftol.
Si el resultado es que el medio de vuelve rosado es positivo para la fermentación de glucosa por la vía butanodiólica y si es el medio se queda amarillento es porque es negativo para la fermentación de glucosa por la vía butanodiólica.
- Citrato.
Medio de cultivo Citrato de Simmons. Se utiliza para determinar si la bacteria es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo. Contiene azul de bromotimol como indicar de pH.
Si se vuelve de color azul intenso es citrato positiva (medio ácido) es porque fermenta el citrato y si es de color verde es citrato negativo porque no fermenta el citrato.
Composición citrato de Simmons g/l.
MATERIAL
Papel de filtro
Gradilla
Pipeta pasteur
Reactivo de Kovac
Reactivo vpA y vpB
Medios cultivados de Indol, RMVP y Citrato de Simmons.
PROTOCOLO
Preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario y se van realizando las pruebas.
- Indol.
Previamente a la prueba se debe realizar la siembra en agua de peptona de las bacterias 2 y 9 y se incuban durante 24h en la estufa a 37ºC.
Después se echan 5 gotas del reactivo Kovac con una pipeta pasteur a la bacteria cultivada en el medio agua de peptona y leemos los resultados a los 2 minutos aproximadamente.
- Rojo metilo.
Previamente a la prueba se debe realizar la siembra en RMVP de las bacterias 2 y 9 y se incuban durante 24h en la estufa a 37ºC.
Después de la siembra se echan 5 gotas del reactivo rojo metilo con una pipeta pasteur a la bacteria cultivada en el medio RMVP, agitamos por rotación y leemos los resultados.
Para saber si la bacteria es capaz de degradar el triptófano se utiliza el reactivo Kovac que reacciona con el indol y forma un anillo coloreado en la parte superior del medio.
Si el resultado es un anillo de color rosa intenso es indol posotivo, por lo que degrada en triptofano, y si el anillo es de color amarillo es indol negativo.
Composición g/l del agua de peptona.
- Rojo Metilo.
Medio de cultivo Clark Lubs (MRVP).
Para determinar la capacidad de la bacteria de fermentar la glucosa por la vía de fermentación ácida mixta que produce etanol y una mezcla de otros ácidos. Para detectarlo se utiliza un indicar de pH rojo metilo que actúa entre 4'2 (rojo) y 6'3 (amarillo).
Si el medio se vuelve rojo se considera positivo a la fermentación de glucosa por la vía ácido mixta y si se queda del color del medio, amarillento, es negativo para la fermentación de glucosa por la vía ácido mixta.
La prueba se debe realizar a las 48h después de realizar la siembra para evitar falsos positivos porque estén fermentando otros alcoholes.
Composición g/l del MRVP
- Voges Proskauer.
Medio de cultivo Clark Lubs (MRVP).Para determinar la capacidad de la bacteria de fermentar la glucosa por la vía de fermentación butanodiólica: produce acetoína que se transforma en 2-3 butanoidil, por la acción alfa-naftol, y produce un compuesto de color rojizo. Para ello se utilizan los reactivos pvA, KOH al 40%, y pvB, alfa-naftol.
Si el resultado es que el medio de vuelve rosado es positivo para la fermentación de glucosa por la vía butanodiólica y si es el medio se queda amarillento es porque es negativo para la fermentación de glucosa por la vía butanodiólica.
- Citrato.
Medio de cultivo Citrato de Simmons. Se utiliza para determinar si la bacteria es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo. Contiene azul de bromotimol como indicar de pH.
Si se vuelve de color azul intenso es citrato positiva (medio ácido) es porque fermenta el citrato y si es de color verde es citrato negativo porque no fermenta el citrato.
Composición citrato de Simmons g/l.
MATERIAL
Papel de filtro
Gradilla
Pipeta pasteur
Reactivo de Kovac
Reactivo vpA y vpB
Medios cultivados de Indol, RMVP y Citrato de Simmons.
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| Reactivos para la realización del IMVIC |
PROTOCOLO
Preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario y se van realizando las pruebas.
- Indol.
Previamente a la prueba se debe realizar la siembra en agua de peptona de las bacterias 2 y 9 y se incuban durante 24h en la estufa a 37ºC.
Después se echan 5 gotas del reactivo Kovac con una pipeta pasteur a la bacteria cultivada en el medio agua de peptona y leemos los resultados a los 2 minutos aproximadamente.
- Rojo metilo.
Previamente a la prueba se debe realizar la siembra en RMVP de las bacterias 2 y 9 y se incuban durante 24h en la estufa a 37ºC.
Después de la siembra se echan 5 gotas del reactivo rojo metilo con una pipeta pasteur a la bacteria cultivada en el medio RMVP, agitamos por rotación y leemos los resultados.
- Voges Proskauer.
Previamente a la prueba se debe realizar la siembra en RMVP de las bacterias 2 y 9 y se incuban durante 24h en la estufa a 37ºC.
Después de la siembra se echan 12 gotas del reactivo vpB, alfa-naftol, y a continuación 4 gotas del reactivo vpA, KOH al 40%.
Una vez que lo hayamos agitado se inclina el tubo para que se oxigene bien y esperamos unos 5 minutos para leer los resultados.
- Citrato.
Primero se ha realizado la siembra por agotamiento de las bacterias 2 y 9 en el medio de citrato de simomons y se ha incubado a 37ºC durante 24-48h.
Después de este tiempo se realiza la lectura de los resultados.
RESULTADOS
- Indol: Ambas bacterias, 2 y 9, son indol negativas.
- Rojo metilo: Ambas bacterias, 2 y 9, son negativas a la fermentación de glucosa por la vía ácido mixta.
- Voges Proscauer: Ambas bacterias, 2 y 9, son negativas a la fermentación de glucosa por la vía butanodiólica.
- Citrato: Ambas bacterias, 2 y 9, son negativas a la fermentación de citrato.
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| Se compara con un control |
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