Prueba de la Oxidasa

PRUEBA DE LA OXIDASA

OBJETIVO

Se quiere determinar la presencia de la enzima citocromooxidasa en el microorganismo para poder identificarlo según su género y especie.

 FUNDAMENTO

 La prueba consiste en poner una colonia bacteriana en contacto con fenildiamina para saber si sintetiza la oxidasa.

 La enzima citocromooxidasa en presencia de oxigeno oxida la fenildiamina produciendo indofenol, que es un producto coloreado.

 Se realiza sobre una tira reactivo y si la zona reactiva en contacto con la bacteria vira a un color violeta es porque es oxidasa positiva. Si de la contrario no produce color en la zona reactiva es porque es oxidasa negativa y, por lo tanto, no está presente la enzima oxidasa.

 MATERIAL

 Papel de filtro
Mechero Bunsen
Gradilla
Asa de siembra
Tiras reactivas para la oxidasa
Siembra de bacterias 2 y 9

 PROTOCOLO

 Preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario y encendemos el mechero bunsen para tener un zona de trabajo estéril.

 Con la llama del mechero bunsen esterilizamos el asa de siembra y cogemos un inóculo de la bacteria, previamente el asa de siembra se enfria.

 Extendemos el inóculo de la bacteria sobre la zona reactiva de la tira reactiva de la oxidasa y volvemos a esterilizar el asa de siembra.

 Esperamos unos 10-30 segundos para poder leer los resultados.

 RESULTADOS

 La bacteria 2 es oxidasa negativa, no se ha producido cambio de color, y la bacteria 9 es oxidasa positiva ya que si ha producido un color violeta.
Oxidasa Negativa - Bacteria 2
Oxidasa Positiva - Bacteria 9

Comentarios

Publicar un comentario

Entradas populares de este blog

Escala de McFarland

Imagen
ESCALA DE MCFARLAND OBJETIVO. Se utilizan métodos de recuento estimado basados en la tubidez para realizar una estimación del número de bacterias totales, tanto viables como no viables. En este caso utilizaremos el método de estándares de turbidez de McFarland. FUNDAMENTO. Los estándares de McFarland son patrones de turbidez basados en suspensiones de sulfato de bario. La escala de McFarland consta de 11 patrones (desde 0,5 a 10) cada uno de los cuales tiene una turbidez comparable a la de una suspensión bacteriana con una densidad determinada. Para estimar la densidad bacteriana de una suspensión se compara visualmente su turbidez con la de los patrones realizados en la escala de McFarland, utilizando un fondo de contraste. MATERIAL. 11 tubos de ensayo para escala de McFarland Matraz de 500ml Matraz de 50 ml Vaso de precipitado Papel de filtro Embudo Pipeta pasteur Varilla Vidrio de reloj Espátula Balanza Pipeta de cristal y cremallera Microp
Leer más

Tinción simple con azul de metileno

Imagen
  TINCIÓN SIMPLE CON AZUL DE METILENO. OBJETIVO. Se utiliza el colorante para teñir los diferentes microorganismos para su posterior observación mientras aún siguen vivos. FUNDAMENTO. La tinción simple se utiliza como único colorante disuelto en disolución acuosa o alcohólica, de manera que todas las bacterias presentes en la extensión se tiñen por igual, de forma homogénea. El uso del colorante se puede suplementar con un mordiente que ayuda a la fijación del colorante. La tinción azul de metileno es una tinción positiva (colorea las bacterias) y se realiza sobre extensiones fijadas por calor. MATERIAL. Papel de filtro Asa de siembra de platino Mechero Bunsen Pinza de madera Portaobjetos Gradilla Puente de tinción Colorante azul de metileno Suero fisiológico Muestra: Actimel PROTOCOLO. Preparamos todo el material necesario en la mesa de trabajo. Encendemos el mechero Bunsen para tener una zona de trabajo estéril y para poder e
Leer más

Prueba de KIA

Imagen
PRUEBA DE KIA OBJETIVO Tras la siembra en medio Agar de hiero de Kligler se quiere identificar Enterobacterias. FUNDAMENTO Identificación de Enterobacterias fermentadoras de glucosa y lactosa, que producen gases como el producto final del metabolismo y precipitación de ácido sulfhídrico que se observan como sales de hierro de color negruzco. MATERIAL Papel de filtro Mechero Bunsen Gradilla Asa de siembra Siembra de bacterias 2 y 9 Medio de cultivo KIA PROTOCOLO Se prepara la mesa de trabajo con todo el material necesario y se enciende el mechero bunsen para mantener una zona de trabajo estéril. Se coge un inóculo de la bacteria 2, esterilizando y enfriando el asa de siembra, y se realiza la siembra en el agar KIA. ` La siembra se realiza haciendo una picadura en el agar y al sacar la punta del asa se termina la siembra realizando una estría en la superficie. Realizamos la misma acción con la bacteria 9.   Se incuba a 37ºC dura
Leer más