Prácticas de Laboratorio: Microbiología

IMVIC OBJETIVO Prueba combinada para la identificación de Enterobacterias su género y especie. FUNDAMENTO Se realizan varias pruebas a una bacteria para poder identificar el tipo de Enterobacteria es: I: Indol M: Rojo metilo V: Voges Proscauer I C: Citrato - Indol. Se realiza un medio de cultivo en agua de peptona. El indol surge del metabolismo del triptófano por la enzima triptofanasa. Para saber si la bacteria es capaz de degradar el triptófano se utiliza el reactivo Kovac que reacciona con el indol y forma un anillo coloreado en la parte superior del medio. Si el resultado es un anillo de color rosa intenso es indol posotivo, por lo que degrada en triptofano, y si el anillo es de color amarillo es indol negativo. Composición g/l del agua de peptona. - Rojo Metilo. Medio de cultivo Clark Lubs (MRVP). Para determinar la capacidad de la bacteria de fermentar la glucosa por la vía de fermentación ácida mixta que produce etanol y una mezcla de

PRUEBA DE LA COAGULASA OBJETIVO Se determina la capacidad de una bacteria de coagular el plasma en presencia de la enzima de la coagulasa. FUNDAMENTO La coagulasa es una enzima que convierte el fibrinógeno en fibrina. Se utiliza para diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa positiva) de otras especies de Staphylococcus (coagulasa negativa). Si al realizar la prueba se forma un coagulo visible, como una maraña blanquecina, será coagulasa positiva, si no se forma el coagulo será coagulasa negativa. MATERIAL Papel de filtro Mechero bunsen Asa de siembra Tubo de hemólisis Gradilla Micropipeta Baño Cultivo de bacterias 2 y 9 Plasma PROTOCOLO Se prepara el material necesario en la mesa de trabajo y se enciende el mechero bunsen para mantener una zona estéril de trabajo. Preparamos un tubo de hemólisis con unos 500 ul de plasma con ayuda de una micropipeta. Esterilizamos el asa de siembra y cogemos un inóculo de la bacteria

PRUEBA DE KIA OBJETIVO Tras la siembra en medio Agar de hiero de Kligler se quiere identificar Enterobacterias. FUNDAMENTO Identificación de Enterobacterias fermentadoras de glucosa y lactosa, que producen gases como el producto final del metabolismo y precipitación de ácido sulfhídrico que se observan como sales de hierro de color negruzco. MATERIAL Papel de filtro Mechero Bunsen Gradilla Asa de siembra Siembra de bacterias 2 y 9 Medio de cultivo KIA PROTOCOLO Se prepara la mesa de trabajo con todo el material necesario y se enciende el mechero bunsen para mantener una zona de trabajo estéril. Se coge un inóculo de la bacteria 2, esterilizando y enfriando el asa de siembra, y se realiza la siembra en el agar KIA. ` La siembra se realiza haciendo una picadura en el agar y al sacar la punta del asa se termina la siembra realizando una estría en la superficie. Realizamos la misma acción con la bacteria 9.   Se incuba a 37ºC dura

PRUEBA DE LA POTASA  OBJETIVO Identificación de bacterias Gram positivas y Gram negativas sin necesidad de realizar una tinción. FUNDAMENTO El KOH al 3% es una prueba de Screening que disuelve la capa de peptidoglicano de las bacterias Gram negativas, al ser su pared celular mucho más fina que las Gram positivas, a las que el KOH al 3% no les afecta. El KOH lisa la célula y libera su contenido al exterior. El ADN, junto a las proteínas desnaturalizadas, al estar en contacto con el KOH forma una solución viscosa. Si, con ayuda de una asa de siembra, levantamos esa solución viscosa se forma un hilo es porque la bacteria es Gram negativas, si no se forma el hila al levantar es porque la bacteria es Gram positiva. MATERIAL -Para la realización de la prueba: Papel de filtro Mechero Bunsen Asa de siembra Portaobjetos Gradilla Pipeta pasteur Cultivo de bacterias 2 y 9 Gradilla KOH al 3% -Para la preparación del KOH: Agua destilada Embudo

SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO OBJETIVO Siembra de microorganismos en diferentes medio de cultivo para observar su crecimiento. FUNDAMENTO Se va a realizar una siembra en diferentes medios de cultivo para poder observar las características de una bacteria según su crecimiento. MATERIAL Papel de filtro Mechero Bunsen Asa de siembra de platino Medios de cultivo  Siembra de microorganismo. PROTOCOLO. - Agar Columbia. Es un medio enriquecido que es excelente para el crecimiento de bacterias exigentes. Es muy utilizado en rutina como medio básico en aislamiento inicial de la mayor parte de las muestras, excepto para orina. La presencia de sangre también permite el estudio de la presencia de hemólisis: - Si se produce hemólisis total: la bacteria es beta-hemolítica. - Si se produce hemólisis parcial: la bacteria es alfa-hemolítica. - Si no se produce hemólisis: la bacterias es gamma-hemolítica. - Agar Levine o EMB. Es un medio Select

PRUEBA DE LA OXIDASA OBJETIVO Se quiere determinar la presencia de la enzima citocromooxidasa en el microorganismo para poder identificarlo según su género y especie. FUNDAMENTO La prueba consiste en poner una colonia bacteriana en contacto con fenildiamina para saber si sintetiza la oxidasa. La enzima citocromooxidasa en presencia de oxigeno oxida la fenildiamina produciendo indofenol, que es un producto coloreado. Se realiza sobre una tira reactivo y si la zona reactiva en contacto con la bacteria vira a un color violeta es porque es oxidasa positiva. Si de la contrario no produce color en la zona reactiva es porque es oxidasa negativa y, por lo tanto, no está presente la enzima oxidasa. MATERIAL Papel de filtro Mechero Bunsen Gradilla Asa de siembra Tiras reactivas para la oxidasa Siembra de bacterias 2 y 9 PROTOCOLO Preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario y encendemos el mechero bunsen para tener un zona de trabajo estéril. Con l

PRUEBA DE LA CATALASA OBJETIVO. Identificación de bacterias con la realización de pruebas bioquímicas que permiten determinar características metabólicas, en este caso, vinculadas a la respiración y que sintetizan la Catalasa. FUNDAMENTO. Es una técnica de Screening en donde la Catalasa hidroliza el peróxido de hidrógeno en agua y oxigeno gaseoso, que se libera formando burbujas.  La Catalasa tiene capacidad de descomponer el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. Cuando a una colonia de bacterias se le añade el peróxido de hidrógeno, y en presencia de la Catalasa, aparecen burbujas por la aparición del oxigeno. Si los resultados son positivos, catalasa-positiva, se formarán burbujas, mientras que si es negativo, catalasa-negativa, no se formarán burbujas. MATERIAL. Papel de filtro Tubo de ensayo Gradilla Mechero Bunsen Asa de siembra de platino Portaobjetos Peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) Bacterias 2 y 9 PROTOCOLO Primero preparamos la