Prácticas de Laboratorio: Microbiología

TINCIÓN DE WIRTZ-CONKLIN (TINCIÓN DE ESPORAS) OBJETIVO. Usar colorantes para saber si las bacterias que se encuentran en la muestra espurulan o no. FUNDAMENTO. Teñir endosporas bacterianas es muy complicado por su situación y su estructura. Para ello vamos a utilizar un colorante en caliente, verde malaquita al 5%, para facilitar la penetración del colorante en el interior de las esporas y usaremos un colorante de contraste, safranina al 0,5% para teñir el resto de bacterias (Bacilos que no hayan espurulado). Como resultado observaremos las esporas de color verde y los bacilos sin espurular de color rosa. MATERIAL. Papel de filtro Mechero Bunsen Portaobjetos Asa de siembra de platino Pipeta pasteur Gradilla Rejilla metálica Pinza de madera Vaso de precipitado Tolunda con algodón y gasa Tubo con muestra ESP1,ESP2, 2 y 9. Microscopio óptico REACTIVOS. Verde malaquita al 5% Safranina al 0,5% Suero fisiológico Agua destilada.

TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN (BAAR) OBJETIVO. Usar colorantes para teñir las bacterias y así poder diferenciarlas según su resistencia a la decoloración con una mezcla Ácido-Alcohol. FUNDAMENTO. En esta técnica queremos diferenciar las bacterias que son ácido alcohol resistentes (BAAR), que son bacilares, de las que no son. Para ello primero usamos un colorante básico en caliente. Las BAAR presentan en su pared ácidos micólicos y ceras que al calentarse dejan pasar el colorante en su interior, en este caso fucsina fenicada. Después se usa un Ácido-Alcohol en frio. Los ácidos micólicos y ceras de la pared de las BAAR se enfrian y se solidifican dejando al colorante atrapado en su interior, mientras que las que no son BAAR se decolorarán. Para terminar se una un colorante de contraste, azul de metileno, que solo teñirá las que no sean BAAR. Como resultados observaremos las BAAC de color rosa y las que no lo son de un azul-violeta. MATERIAL. Papel de filtr

TINCIÓN DE GRAM OBJETIVO. Se realiza la tinción para conocer la diferente naturaleza de algunas bacterias y averiguar si son Gram positivas o Gram negativas. FUNDAMENTOS. Las bacterias Gram positivas tienen una pared bacteriana mucho más gruesa que las Gram negativas. Se utiliza un colorante catiónico, en este caso cristal violeta, que teñirá todas las bacterias ya que penetra dentro de su membrana. Se usa Lugol como mordiente que forma complejos insolubles con el cristal violeta. Se decoloran las bacterias con alcohol-acetona que solo decolorará las bacterias Gram negativas ya que disuelve su membrana externa y saca el colorante. Por último, se una un colorante de contraste, safranina, que teñirán a las Gram negativas pero no las Gram positivas ya que no puede penetrar dentro de la membrana porque en ella se encuentra el cristal violeta. Veremos las bacterias Gram positivas de color azul-violeta y las Gram negativa de color rosa. MATERIAL. Papel

SIEMBRA EN PLACA POR AGOTAMIENTO EN ESTRÍA CON ASA DESECHABLE OBJETIVO. Siembra de microorganismos en un medio sólido adecuado para su posterior crecimiento. FUNDAMENTO. Se realiza un cultivo de microorganismo en un medio sólido con los nutrientes necesario para su proliferación y crecimiento exponencial, manteniéndolas en condiciones adecuadas para ello. Se realiza por agotamiento para poder separar las colonias y poder estudiarlas posteriormente. MATERIAL Papel de filtro Asa desechable Mechero Bunsen Cont enedor de residuos Placa de Petri con medio sólido Tubos con cultivo de celular 2 y 9 PROTOCOLO Preparamos todo el material necesario en la mesa de trabajo. Rotulamos la placa de Petri en la parte de abajo, nunca en la tapadera, con la fecha y el tipo de siembra. Encendemos en mechero Bunsen para tener un área de trabajo estéril y cogemos el asa de siembra estéril cerrando bien el paquete.

SIEMBRA EN PLACA POR AGOTAMIENTO EN ESTRÍA CON ASA DE PLATINO OBJETIVO. Siembra de microorganismos en un medio sólido adecuado para su posterior crecimiento. FUNDAMENTO. Se realiza un cultivo de microorganismo en un medio sólido con los nutrientes necesario para su proliferación y crecimiento exponencial, manteniéndolas en condiciones adecuadas para ello. Se realiza por agotamiento para poder separar las colonias y poder estudiarlas posteriormente. MATERIAL Papel de filtro Asa de platino Mechero Bunsen Gradilla Placa de Petri con medio sólido Tubo con cultivo de celular 2 y 9. PROTOCOLO Preparamos todo el material necesario en la mesa de trabajo. Rotulamos la placa de Petri en la parte de abajo, nunca en la tapadera, con la fecha y el tipo de siembra. Encendemos en mechero Bunsen para tener un área de trabajo estéril y para esterilizar el asa de platino. Cogemos el tubo con la muestra y cogemos la muestra de la parte superior, previamente enfriada el asa

SIEMBRA EN MEDIO SÓLIDO OBJETIVO. Siembra de microorganismos en un medio sólido adecuado para su posterior crecimiento. FUNDAMENTO. Se realiza un cultivo de microorganismo en un medio sólido con los nutrientes necesario para su proliferación y crecimiento exponencial, manteniéndolas en condiciones adecuadas para ello, para su posterior estudio. MATERIAL Papel de filtro Asa de platino Mechero Bunsen Gradilla Tubo con medio sólido Tubo con cultivo de células de la mucosa oral PROTOCOLO Preparamos la mesa de trabajo con todo el material necesario. Encendemos en mechero Bunsen para tener un área de trabajo estéril y para esterilizar el asa de platino. Con la otra mano cogemos el tubo con la muestra de la mucosa oral y pasamos la boca del tubo por la llama del mechero. Cogemos la muestra de la parte del fondo del tubo y movemos un poco para coger mayor carga de microorganismos, previamente habiendo enfriado el asa de platino para no matar a las bacteri

  TINCIÓN SIMPLE CON AZUL DE METILENO. OBJETIVO. Se utiliza el colorante para teñir los diferentes microorganismos para su posterior observación mientras aún siguen vivos. FUNDAMENTO. La tinción simple se utiliza como único colorante disuelto en disolución acuosa o alcohólica, de manera que todas las bacterias presentes en la extensión se tiñen por igual, de forma homogénea. El uso del colorante se puede suplementar con un mordiente que ayuda a la fijación del colorante. La tinción azul de metileno es una tinción positiva (colorea las bacterias) y se realiza sobre extensiones fijadas por calor. MATERIAL. Papel de filtro Asa de siembra de platino Mechero Bunsen Pinza de madera Portaobjetos Gradilla Puente de tinción Colorante azul de metileno Suero fisiológico Muestra: Actimel PROTOCOLO. Preparamos todo el material necesario en la mesa de trabajo. Encendemos el mechero Bunsen para tener una zona de trabajo estéril y para poder e